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企业展示抗体偶联药物（Antibody-Drug Conjugate, ADC）因其独特的结构特性，兼具靶向精准性和强效细胞杀伤力，在肿瘤治疗领域展现出显著潜力。ADC通常由三部分组成[1]：
靶向抗体：特异性识别肿瘤相关抗原；
细胞毒性载荷（Payload）：具有强效杀伤作用的小分子毒素；
连接子（Linker）：连接抗体与载荷，调控药物释放。
由于其结构复杂性和多组分特性，ADC在体内可经历脱偶联、代谢转化及降解等过程，产生多种存在形式，包括：完整ADC、总抗体（含裸抗体）、偶联抗体（DAR ≥1）、游离Payload及其代谢物（如Payload-linker、Payload-linker-氨基酸复合物等）。全面表征各组分的体内暴露特征（浓度、形式、动态变化），对理解ADC的药效、毒性及稳定性至关重要。因此，建立稳定、灵敏且多组分整合的生物分析方法，已成为ADC研发的关键环节。
图1. ADC药物的作用机理
一、ADC生物分析特点和方法选择
2024年3月FDA发布“Clinical Pharmacology Considerations for Antibody-Drug Conjugates Guidance for Industry”[2]指南，明确要求监测：
游离Payload及其药理活性代谢物；
完整ADC；
总抗体（含ADC与裸抗体）；
药物-抗体比（Drug-to-Antibody Ratio, DAR）。
ADC兼具小分子（Payload）和大分子（抗体）的双重属性，其生物分析需采用多平台整合策略[3]。常用的分析方法包括配体结合分析（Ligand Binding Assay, LBA）、LC-MS/MS法、亲和捕获LC-MS/MS、以及亲和捕获LC-HRMS，具体选择取决于分析物类型：
二、基于LC-MS平台的ADC分析策略
可裂解连接子（如Val-Cit、Glu-Val-Lys）：
不可裂解连接子（如MC、SMCC）：
总抗体：采用抗IgG抗体捕获所有抗体形式（DAR ≥0），酶解后检测恒定区替代肽段（如Fc区肽段）。 偶联抗体（ADC）：必须使用抗-Payload抗体进行特异性捕获，再酶解检测替代肽段，以确保仅定量DAR ≥1的分子。
前处理：蛋白沉淀（PPT）、液液萃取（LLE）及固相萃取（SPE）法； 关键注意事项：
需要较高的检测灵敏度：由于ADC药物给药后小分子毒素的释放量有限，通常需要较高的检测灵敏度一般需要在pg/mL级别； 需要关注ADC或Payload相关成分对于游离小分子毒素检测的干扰，在方法开发和验证过程中进行考察； 防止样本处理过程中ADC释放额外Payload（冰上操作、加蛋白酶抑制剂、控pH）； 排除源内裂解干扰，需要在方法开发时进行考察并对液相条件进行优化。
免疫捕获：通常采用通用型免疫捕获试剂（如抗IgG抗体）进行免疫捕获； 洗脱富集：将载体进行洗脱得到纯化的ADC及抗体蛋白，可直接进样分析或经过还原处理； HRMS分析：不同DAR值的抗体有不同的分子量，采用高分辨质谱进行检测，可以获得样品中各成分的质荷比； 去卷积分析：对HRMS检测获得的质荷比，经过软件分析得到不同成分的去卷积质谱； DAR值计算：根据不同DAR值组分的质谱强度，归一化计算其平均DAR值。
三、基于LC-MS平台分析ADC的关键考量
连接子的类型（可裂解vs.不可裂解）； Payload偶联位点（半胱氨酸vs.赖氨酸）； 是否有抗Payload抗体（决定能否用LBA）； Payload或Payload-linker是否为全新化学实体； 替代肽段的选择：替代肽段需具备高特异性、高响应、无修饰干扰，可通过生物信息学工具（如Skyline）筛选。
图3. 基于LC-MS平台进行ADC药物分析策略图[4]
结语
随着质谱技术的进步，LC-MS技术已成为ADC生物分析不可或缺的工具。有济医药已建立完善的LC-MS平台，成功完成多项ADC药物的分析，涵盖新型载荷、多样化连接子及不同类型抗体，可为ADC全生命周期研发提供全方位技术服务。
